腺病毒包裝

簡要描述：腺病毒（Adenovirus）是目前*可靠的重組病毒表達(dá)系統(tǒng)之一，可用于在哺乳細(xì)胞中瞬時(shí)及高水平地表達(dá)shRNA或目的蛋白。

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廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
更新時(shí)間：2024-05-13
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產(chǎn)品介紹：

腺病毒（Adenovirus）是目前可靠的重組病毒表達(dá)系統(tǒng)之一，可用于在哺乳細(xì)胞中瞬時(shí)及高水平地表達(dá)shRNA或目的蛋白。其具備以下優(yōu)點(diǎn)：

　　1. 宿主范圍廣。腺病毒可感染一系列哺乳動(dòng)物細(xì)胞，除可感染幾乎所有人的細(xì)胞類型外，還可感染包括大鼠、小鼠、兔、豬、羊、猴、雞等物種。

　　2. 因腺病毒的感染不依賴細(xì)胞周期，故其既可以感染增殖細(xì)胞也可以感染非增殖細(xì)胞。

　　3. 腺病毒具有嗜上皮細(xì)胞特性，因大多數(shù)腫瘤細(xì)胞均屬于上皮細(xì)胞，這使得腺病毒非常適合應(yīng)用于基因治療領(lǐng)域。

　　4. 病毒滴度高，可用于動(dòng)物水平的實(shí)驗(yàn)。

　　5. 有較好的生物安全性。腺病毒攜帶的基因不會(huì)整合到宿主細(xì)胞基因組中；實(shí)驗(yàn)中雖然會(huì)有一定機(jī)率出現(xiàn)RCA（即復(fù)制型腺病毒），但由于大多數(shù)成人體內(nèi)都有針對(duì)腺病毒的抗體，所以一般危害不大。

技術(shù)要點(diǎn)

重組腺病毒的包裝制備：重組腺病毒是從由侵染色斑組成單位（pfu）中分離獲得的。一個(gè)單色斑是線性載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后在20×15 cm板上由293A細(xì)胞連續(xù)侵染后被挑選和擴(kuò)增形成的。重組腺病毒可通過超速離心純化，并測定滴度及進(jìn)行PCR鑒定。純化后重組腺病毒的滴定濃度為1010pfu/ml，獲得的量為2-4 ml。

重組腺病毒的特性：一般的，單個(gè)腺病毒通常是在30×150mm細(xì)胞培養(yǎng)皿中制備的。

獲得量：1×10病毒顆粒/細(xì)胞

滴定濃度：1×1010～1×1012個(gè)病毒基因組/ml

zui終體積：1 ml純化后的病毒液（儲(chǔ)存于PBS）

儲(chǔ)存：批量儲(chǔ)存的*條件為-80°C

幾種病毒載體的區(qū)別：

	腺病毒表達(dá)系統(tǒng)	慢病毒表達(dá)系統(tǒng)	逆轉(zhuǎn)錄病毒
病毒基因組成	雙鏈DNA	單鏈RNA	單鏈RNA
載導(dǎo)容量	< 8 kb	< 8 kb	< 6kb
基因整合功能	無。病毒基因組游離于宿主基因組外，瞬時(shí)表達(dá)外源基因	有。病毒基因組整合于宿主基因組，長時(shí)間、穩(wěn)定表達(dá)外源基因	有。
表達(dá)豐度	高水平表達(dá)	中	中
表達(dá)時(shí)間	快(1-2天)	慢（2-4天）	快（1-2天）
感染細(xì)胞類型	分裂和不分裂細(xì)胞	分裂和不分裂細(xì)胞。適用于難轉(zhuǎn)染細(xì)胞	感染分裂細(xì)胞，但在干細(xì)胞中表達(dá)效率低
滴度TU/ml	10^12	10^9	10^9
四環(huán)素誘導(dǎo)系統(tǒng)	不可以	TET-ON , TET-OFF	不可以
毒性作用	細(xì)胞毒性	遺傳毒性	遺傳毒性
免疫原性	高免疫原性	低免疫原性	低免疫原性
動(dòng)物模型	不能得到轉(zhuǎn)基因動(dòng)物	可產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，效率達(dá)50以上	可以，但很難
安全系數(shù)	高	高	中
能否用于MIRCORNA	可以	可以	不可以
RNAi	病毒進(jìn)入細(xì)胞往往引起細(xì)胞內(nèi)干擾素反應(yīng)，不適合做RNAi實(shí)驗(yàn)	適合，是RNAi實(shí)驗(yàn)的優(yōu)選工具	可以用作RNAi實(shí)驗(yàn)
基因過表達(dá)	包裝容量較大。可以滿足較大基因的包裝，是過表達(dá)基因的優(yōu)選工具	包裝容量有限，過表達(dá)的基因過大時(shí)，病毒滴度受到影響	包裝容量有限，過表達(dá)的基因過大時(shí)，病毒滴度受到影響
常見應(yīng)用	1、體外細(xì)胞基因轉(zhuǎn)導(dǎo)2、基因治療	1、體外細(xì)胞基因轉(zhuǎn)導(dǎo)2、基因治療	體外細(xì)胞基因轉(zhuǎn)導(dǎo)，突變篩選，功能基因庫構(gòu)建